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生物顯微鏡的成像原理（二）
三、顯微鏡照明系統(tǒng)
為了獲得良好的工作效果，生物顯微鏡必須注意照明的正確使用。生物顯微鏡的照明方式按其用途可以分成3類。
1．用透射光照明。在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)檢驗上用的zui多zui廣，一般在數(shù)值孔徑小的低倍物鏡，可采用一種zui簡單的照明器，用一凹面鏡（或平面鏡），使白然光經(jīng)凹面鏡后被會聚在載物片的樣品上。對于高倍鏡或油浸物鏡，必須采用專門的聚光器，位寬大的平行光束經(jīng)集光鏡后被會聚成與物鏡孔徑相適應(yīng)的錐形光束，方能滿足物鏡分辨本領(lǐng)的需要。而另一方面也增加了樣品的亮度。采用透射光照明，還有兩種方法，一種是將光線聚焦在標本上，稱作臨界照明，如果光源表面亮度不均勻．則在載物片上也反映出來，如燈絲像等。在微型顯微鏡中，為了消除這一缺點，在案光器下面的藍色濾光片的一面．采用磨砂而減少僚的亮度不均勻現(xiàn)象。另一種方法叫庫勒照明，如圖3—3所示。由光源發(fā)出的光先經(jīng)過毛玻璃L，再經(jīng)過透鏡K把毛玻璃的像里在案光器下部的光欄J2處，集光器把光欄J1的像呈在物面上，并且把J2像呈在無限遠，這種照明，即使光源本身亮度不均勻，而在標本上的照明也是十分均勻的。而且調(diào)整好J1的孔徑，還可以減少雜散光的影響。
2。用于非透明體的照明。對于非透明體光線不能透射，這時只能從側(cè)面斜射照亮標本，如圖3—4所示。當用低倍物鏡時，有一定的工作距離，可以從上邊或旁邊照射被觀察物的表面，使漫射光進入物鏡，這時不能用蓋玻片，否則規(guī)則的反射光將進入物鏡影響觀察。因為是單向側(cè)面照明，這樣被觀察的標本可能有些變形。為了糾正這一缺點，還可以把物鏡放在環(huán)形光束中，采用全向照明。
3．用暗視場觀察微粒的照明。在通常的阿貝集光器下面，加一個環(huán)形光闌，將中間光線遮住．僅使邊緣光線進入集光，由于光線沒有直接進入物鏡，因此視場背景是暗的，可以做暗視場的透明體觀察。這種照明對于線形或點形，細微結(jié)構(gòu)透明體觀察．如矽藻完皮、動植物的各種組織、血液和含有細菌的液體等有較好的效果，如圖3—5所示。
應(yīng)用暗視場集光器來觀察標本，必須在夜間或暗室中進行，光源越強越好。用陽光直射、弧光燈或500支光電燈都行，但須使光線平行地射到反光鏡上。這可在光源與顯微鏡之間安插一塊凸透鏡，或用500mL燒瓶盛10％硫酸飼溶液，將光源剛好放在焦點處即可。所用的接物鏡的鏡口率只宜在1.0左右，太高則看不清物像。新式接物鏡管內(nèi)多安裝有小型光闌，可以隨意改變鏡口率的大小。
用普通生物顯微鏡也可以得到暗視場的效果：即將集光器卸下，并且把反光鏡盡量歪在一邊使反射后的光線不能直接射人接物鏡，則可得到相類似的結(jié)果。此種方法所得的光線僅只能從某一方面照射，如圖3—6所示。所以效果較差，而且只能在低倍鏡中使用，在高倍鏡和油浸系使用效果都不好。
如想光線能從各方面照射，而—時又無暗視物集光器，則可將普通明視場集光器稍加改變即可。即在集光鏡下面加一黑色之光擋，把來自反光鏡的光柱的中央部分遮掉，允許邊緣簡狀光線進入集光鏡。所遮掉的光的面積應(yīng)等于接物鏡的鏡口率，只有這樣才不致有光線直接射入接物鏡，如圖3—7所示。圖中，斜線表示直穿的光線，虛線表示反射的光線。另外一個方法就是將集光鏡上面一個透鏡的下面中央部用黑漆涂掉或剪一塊圓形黑色紙粘住即可，面積大小也應(yīng)剛好等于接物鏡的鏡口率，這和用遮光板的作用是一樣的。另外在接物鏡上組透鏡的上面，用適當大小的黑紙片遮去中心部的光線，或是在眼點處設(shè)法遮掉中心部光線．然后用光鬧遮掉四周光線，也可得到較好的效果。要想得到良好的暗視場觀察．必須配備整套暗視場裝量為*。
四、生物顯微鏡的蓋玻片及載玻片
在360—780mm的光譜范圍內(nèi)，其光吸收應(yīng)為zui小。在正常目視觀察下，不應(yīng)有任何斑點、氣泡、條紋和夾雜物。此外，應(yīng)消除應(yīng)力，無放射背景熒光。
就其化學(xué)穩(wěn)定性而言，對正常用于顯微術(shù)中的浸液、溶劑、標本等，必須是化學(xué)惰性。
蓋玻片在光學(xué)設(shè)計時常作為物鏡的一部分，和物鏡一起消像差，因此其材料和厚度必須加以規(guī)定。
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