體視顯微鏡-蓋玻片的影響

對(duì)于數(shù)值孔徑在0.4以上的物鏡來(lái)說(shuō)蓋玻片被包括在光學(xué)矯正之內(nèi)，它成為像的形成中一個(gè)*的部分，因此我們?cè)诮榻B物鏡時(shí)必須討論蓋玻片的影響。

蓋玻片的基本功能是對(duì)標(biāo)本起保護(hù)作用，但是它的存在卻影響到來(lái)自標(biāo)本光線的光路。在使用于系物鏡時(shí)，來(lái)自標(biāo)本的光線在玻璃空氣界面上被折射。從圖3．6中可以看出，光線與光軸之間的角度愈大，這種影響也就愈明顯，這種現(xiàn)象產(chǎn)生了一種很多方面與透鏡的球面差（地說(shuō)是負(fù)球面差）相似的效應(yīng)。除了蓋玻片外，在蓋玻片下面的封藏劑（一般折射串接近于玻璃）也起一定的作用，但由于達(dá)層封建劑一般很薄，因此在引起這種光學(xué)現(xiàn)象中蓋較片起著遠(yuǎn)為重要的作用。

從圖3．6中還可以看出，蓋玻片肋厚度會(huì)彤響這種效應(yīng)，因此只有對(duì)于一定的蓋破片厚度，物鏡的矯正才是可能的。如果益玻片太薄或太厚，都會(huì)由于這種負(fù)球面差而使像模糊或降低像的質(zhì)量。益玻片的據(jù)準(zhǔn)厚度在上統(tǒng)一規(guī)定為0.17mm，因此，現(xiàn)在所有的物鑰都是根據(jù)這個(gè)厚度的矯正而設(shè)計(jì)的。實(shí)際上我們所使用的孟玻片與0.17mm的標(biāo)準(zhǔn)值總是有相當(dāng)?shù)钠睿儎?dòng)在0.145--0.185mm之間。而不同孔徑的物鏡，對(duì)于蓋玻片厚度的要求有不同的可允許偏差范圍，曲田的孔徑愈大，這種可允許的偏差范圍就短小（表5）。因此，當(dāng)使用數(shù)值孔徑低于o．4購(gòu)物鏡時(shí)，蓋玻片本身的影響是無(wú)足輕重的；當(dāng)使用數(shù)值孔徑為0.5或0.6的物鏡時(shí)，對(duì)于一般在0.145--0.185mm之間變動(dòng)的益玻片厚度仍然是影響不大的；當(dāng)使用較高數(shù)值孔徑（o．75一o．95）的干系物鏡時(shí)，在上述范圍內(nèi)變動(dòng)的蓋玻片厚度會(huì)對(duì)仍的質(zhì)量產(chǎn)生很大影響，例如在使用數(shù)值孔徑為0.90的物鏡時(shí)，蓋玻片厚度的0.01—0.02mm的差異就臺(tái)明顯地影響像的質(zhì)量。

體視顯微鏡由于在標(biāo)本和益玻片之間還有一層一定厚度的封蘸劑，這實(shí)際上增加了益玻片的厚度，因此所使用的蓋玻片厚度必須薄于o．17mm，選擇厚度在o．15一o．16mm之間的蓋玻片。此外，在封藏切片時(shí)應(yīng)注意不要把樹(shù)膠滴得太多，也不宜使用過(guò)于粘稠的樹(shù)膠，以免使樹(shù)膠層太厚而降低像的質(zhì)量。必要時(shí)還可以在封藏后立即用小重物在益玻片上適當(dāng)加壓，以排出過(guò)量的樹(shù)膠。

對(duì)于在生物顯微技術(shù)中廣泛使用的5—7μm厚的石蠟切片，根據(jù)計(jì)算zui合適的益玻片厚度為0．155mm。

另一方面當(dāng)用顯微鏡觀察沒(méi)有蓋玻片的標(biāo)本時(shí)，由于物鏡球面差的過(guò)度矯正，具有較大孔徑的物鏡格會(huì)形成一個(gè)模糊不清的像，為此，現(xiàn)在已制造出用于不帶益玻片標(biāo)本觀察用的特殊物鏡，在這種物鏡上標(biāo)有“O”字樣。

如上所述，體視顯微鏡由于蓋破片的厚度很難都達(dá)到o．17mm的值，往往在o．145一o．185mm之間變動(dòng)，因此現(xiàn)在已設(shè)計(jì)制造出數(shù)值孔徑大于o．75的具有校正環(huán)的干系物鏡（圖3．7）。這種具矯正環(huán)的物鏡對(duì)于在o．12一o．22mm范圍之內(nèi)的益玻片厚度誤差部可以進(jìn)行校正。在這種物銳簡(jiǎn)上裝有環(huán)狀調(diào)節(jié)裝置，通過(guò)調(diào)節(jié)物鏡中各組透鏡之間的距離，從而校正由蓋玻片厚度誤差所產(chǎn)生的影響。在這種物鑷的校正環(huán)上具有精細(xì)的刻度，對(duì)于已知的蓋玻片厚度，可以預(yù)先在刻度尺上對(duì)猴相應(yīng)的刻度。熟練的觀察者，不用測(cè)定蓋玻片厚度，只旋轉(zhuǎn)校正環(huán)就能調(diào)節(jié)蓋玻片厚度混差所引起的不良影響。如果在物鏡上沒(méi)有校正裝置，可伸長(zhǎng)的鏡簡(jiǎn)（圖1．3）可以在一定程度上用于蓋玻片厚度的校正：當(dāng)蓋玻片太厚時(shí)可以縮短鏡筒：當(dāng)蓋玻片太薄時(shí)可以伸長(zhǎng)鏡筒。

體視顯微鏡只有使用高倍干系物鏡時(shí)，對(duì)蓋玻片厚度的校正才是重要的。在使用油浸物鏡時(shí)，由于標(biāo)本和物鏡之間的蓋玻片和浸油具有相同的折射串，蓋玻片的影響在像的形成中實(shí)際上是不起作用的。由于油涇物鏡*排除了蓋玻片的影響，并且能適當(dāng)?shù)卦龃竽姆床睿湫Ч^(guò)了相同質(zhì)量的于系物鏡，因此在zui近幾年，人們對(duì)數(shù)值孔徑為o．8—1．2、放大倍數(shù)在高倍干系物鏡范圍內(nèi)（40一70×）的油浸物鏡愈來(lái)愈感興趣。

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